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猪蓝耳病毒PCR检测的前处理步骤有哪些

更新日期: 2025-10-28
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猪蓝耳病毒(PRRS)检测试剂盒用于检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中猪蓝耳病毒(PRRS)的浓度。
【实验原理】
应用双抗原夹心法测定标本中指标表达。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可与样品中指标相结合,经过彻-底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)与待测样品中猪蓝耳病毒(PRRS)浓度呈正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中猪蓝耳病毒(PRRS)的浓度。
猪蓝耳病毒(PRRSV)PCR检测的前处理步骤主要包括样本采集、保存及核酸提取:
样本采集‌:
‌组织样本‌:优先采集肺脏、扁桃体、淋巴结等含毒量高的组织,活体剖检时需无菌操作,每份组织单独封装‌。
‌血液/血清‌:前腔静脉采血3-5ml,凝固后2-8℃冷藏(≤3天)或-20℃冷冻(≤30天),避免溶血‌。
‌其他样本‌:如口腔液、阉割睾丸液、死胎舌头等,需注意避免环境污染。
样本保存与运输‌:
‌短期保存‌:2-8℃冷藏(≤72小时),长期需-70℃冷冻,避免反复冻融(≤3次)‌。
‌运输条件‌:加冰密封,维持低温状态。
核酸提取‌:
‌组织处理‌:称取2g组织加入PBS研磨,反复冻融3次裂解细胞。
‌裂解与纯化‌:使用TRIzol法提取RNA,加入氯仿-异戊醇抽提,异丙醇沉淀后75%乙醇洗涤,DEPC水溶解‌。
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